Quand le gentil rêveur Larry Daley (Ben Stiller) est embauché comme gardien de nuit d’un musée d'histoire naturelle, il découvre vite qu'une malédiction anime les expositions la nuit et il se retrouve face à face avec un T-Rex, de minuscules armées de Romains et de cow-boys et un singe espiègle qui le pousse à bout. À l’aide du Président Roosevelt (Robin Williams), il tente de contrôler ce chaos.