ジェイ・バルシェルの掛け声で“笑ってはいけない列車”に飛び乗ったコメディアンたちは、振り落とされないよう必死にしがみつく。トム・グリーンと熱烈なサックスのおかげで、列車は早くも脱線寸前だ。
抱腹絶倒の壮絶なお笑いバトルがいよいよ本格化!ジェイはメイとジョンを過酷な“お仕置きボックス”に送り込む。そしてサプライズゲストも登場。コメディアンたちは笑いをこらえられるか?
第4話はテーブルとの性交、偽物のオッパイ、不気味な操り人形、怒ったアカデミー賞ノミネート者、そしてピザ配達人と盛りだくさんの内容。挑戦者たちが笑いをこらえようと必死になる中、コリンが強烈な攻めを見せ、トムを追いつめる。
第5話では生き残っているコメディアンたちが怪人に取りつかれ、あらゆることを質問し始める。強烈なラップを歌い出す者、自虐的な「ハムレット」を演じ始める者。そして残った4人の挑戦者にジェイから新たなルールが告げられる。
第3話ではコリンがリス人間になり、ブランドンが強烈なショーを披露し、参加者の間ではおかしなフランス語が飛び交う。レッドカードをもらったら即退場のゲーム。スタジオから去ることになるのは一体、誰だ?