Ulusal Tarih Müzesinin karanlık koridorları belki de en inanılmaz günlerini yaşıyordu. Tarih öncesi yaratıklar, korkunç eski çağ savaşçıları, kayıp kabileler, tarihin gördüğü en büyük kahramanlar ve daha neler neler tarihin koridorlarından çıkıp bu müzede yerlerini almışlardı. Hepsi dondurulmuş gibi... ya da dondurulmadılar mı acaba? Bir aksiyon komedi filmi olan 'Night at the Museum', Ulusal Tarih Müzesi'nin yeni gece bekçisi Larry, tüm ziyaretçiler evlerine gittiklerinde asıl maceranın başladığına tanık olacaktır... Hayatı boyunca fantastik maceralar peşinde koşmuş olan Larry Daley (Ben Stiller), işsiz kalıp oğlunu göremeyecek duruma geldiğini fark edince gerçek bir iş arayışına girer. Rüyalarındaki büyük hayalin bir gün onu bulacağından emindir. Fakat böyle bir hayalin bu kadar canlı ve heyecanlı gerçekleşeceğinden tabii ki haberi yoktur...