西元前480年，強盛的波斯帝國由國王瑟西斯御駕親征，率領大軍進攻希臘，以驍勇善戰聞名的斯巴達國王雷奧尼達(傑瑞德巴特勒 飾)率領300名勇士守鎮要塞溫泉關隘口。面對波斯聲勢浩大的百萬大軍，斯巴達300壯士形同自殺部隊，他們被授與的最大的任務是犧牲自己，爭取時間以讓其他希臘軍隊得以部署整頓迎戰波斯的入侵。 然而英勇的斯巴達勇士人少卻志氣激昂，不甘心於僅僅是拖延時間的指令，各個置生死於度外，以守衛自己的家園，消滅最多的波斯大軍為己任。300名斯巴達壯士最後全數陣亡，但也讓波斯大軍付出了兩萬兵力的慘烈代價，他們的英勇行為最終感召了希臘全國上下民心士氣，團結一致將波斯大軍殲滅。